骨組織ALP+TRAP雙重染色

服務(wù)介紹：

骨組織使用堿性磷酸酶（ALP）進(jìn)行染色可明確成骨細(xì)胞的成骨潛能，使用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色可明確破骨細(xì)胞的骨吸收能力。通過對這兩種特異性標(biāo)志酶（ALP/TRAP）的同時檢出，可以分析骨相關(guān)細(xì)胞的分化及骨組織的生長情況。

實驗采用偶氮偶聯(lián)法來顯示堿性磷酸酶（ALP）和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的活性，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸酯水解，釋放出磷酸與萘酚，后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色（藍(lán)色）產(chǎn)物，以此證明堿性磷酸酶（ALP）的定位。在酸性條件下，酸性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸酯水解，釋放出磷酸與萘酚，后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色（紅色）產(chǎn)物，以此證明抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的定位。ALP藍(lán)色陽性信號和TRAP紅色陽性信號，紅藍(lán)色對比鮮明，可清楚同時顯示成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞的分布及含量的變化。

實驗大體流程：

骨組織PFA 4℃固定保存一周內(nèi)（24h-48h最佳）——骨組織用我司EDTA脫鈣液4℃低溫脫鈣——脫水浸蠟包埋石蠟切片——石蠟切片脫蠟至水——提前配制過濾的ALP染色液染色——水洗——提前配制過濾的TRAP染色液染色——烘箱烤片——中性樹膠封片。

結(jié)果判讀：

骨組織沿骨膜內(nèi)整齊排列的矮柱狀成骨細(xì)胞呈藍(lán)色，軟骨處和骨小梁邊緣呈藍(lán)色，破骨細(xì)胞呈酒紅色或者淺紅色，細(xì)胞核呈綠色。

送樣運輸要求：

1、做骨組織ALP+TRAP雙重染色需要用PFA 4℃固定保存運輸，固定一周內(nèi)脫水包埋切片染色。室溫固定數(shù)小時就會影響酶活，4℃固定超過一周也會影響酶活，導(dǎo)致陽性減弱甚至丟失。

2、染ALP+TRAP雙重染色的骨組織需要使用我司EDTA脫鈣液4℃低溫脫鈣。其他脫鈣液脫鈣的組織，不保證染色結(jié)果。用酸性脫鈣液脫鈣的骨組織，酶失活陽性丟失。建議在我司進(jìn)行骨組織的全套脫鈣制片和染色。

3、不脫鈣骨組織前期樣本制片處理方式對ALP酶活影響較大，不脫鈣骨組織切片和切磨片目前不建議做此染色。