甲基化檢測(cè)BSP

服務(wù)介紹：

亞硫酸氫鹽處理后測(cè)序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是檢測(cè)基因甲基化的經(jīng)典方法，其原理為：用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)被轉(zhuǎn)化為尿-嘧啶(U)，而甲基化的胞嘧啶則不變。隨后設(shè)計(jì)BSP引物進(jìn)行PCR，在擴(kuò)增過(guò)程中尿-嘧啶全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶。最后，將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與未經(jīng)處理的序列比較，分析CpG位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化，這種方法稱為BSP-克隆測(cè)序法。此方法精確度高，能明確目的片段中每一個(gè)CpG位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)。一般選取10個(gè)克隆子的測(cè)序結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

　　實(shí)驗(yàn)流程：

取材-提取基因組DNA-亞硫酸氫鹽處理-純化DNA-BSP引物合成-PCR擴(kuò)增-TA克隆-測(cè)序-發(fā)報(bào)告

送樣運(yùn)輸要求：

動(dòng)物組織：新鮮的組織量100 mg(黃豆大小)，最少50 mg（綠豆大小），脂肪組織、結(jié)締組織、纖維化組織適當(dāng)增加。干冰運(yùn)輸。

植物組織：新鮮的葉、果肉、種子等最少需100 mg。干冰運(yùn)輸。

細(xì)胞：1×10^6個(gè)細(xì)胞，收集細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。

全血：最少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管，-20度運(yùn)輸。

DNA：體積≥50 uL，濃度≥ 50 ng/uL，干冰運(yùn)輸。

注：植物樣本的甲基化實(shí)驗(yàn)需要客戶提供具體的啟動(dòng)子序列信息。